兩只克隆猴目前生長狀況良好；第三只克隆猴最早月底誕生

新京報訊 昨天，世界頂尖生物學術刊物《細胞》(Cell)以封面文章的形式在線發表中國科學家成功克隆靈長類動物獼猴的成果。中科院神經科學研究所團隊突破了體細胞克隆猴的世界難題。

去年11月27日，世界上首個體細胞克隆猴“中中”在中科院神經科學研究所、腦科學與智能技術卓越創新中心的非人靈長類平臺誕生， 12月5日第二個克隆猴“華華”誕生。

據介紹，“姐妹”倆的基因，來自同一個流產的雌性獼猴胎兒。科研人員提取了這個獼猴胎兒的部分體細胞，將其細胞核“植入”若干個“摘除”了細胞核的卵細胞，結果產生了基因完全相同的后代，這個過程也就是克隆。

中國科學院神經科學研究所非人靈長類研究平臺主任孫強介紹，他們當時移植了79個胚胎，有六個代孕母猴懷孕，最終健康產下了兩個猴寶寶。

孫強說，中中、華華兩個克隆猴有專業的獸醫團隊和精心的呵護，目前生長情況良好，沒有任何異常。通過27個微衛星DNA位點分析證明克隆猴“中中”和“華華”的核基因組信息與供體體細胞完全一致。按他的說法是，長得越來越像。

記者從神經所了解到，體細胞克隆猴還有第三只，目前尚在代孕母猴的孕育中。如果一切順利，將在本月底或下月初誕生。

- 焦點

1 克隆猴有幾道坎要過？

孫強介紹，克隆猴之所以這么多年沒有成功主要有三個難點。

一是細胞核不易識別，“去核”難度大。作為受體的卵細胞，必須先把細胞核“摘除”，才能容納體細胞的細胞核，重新構建細胞。但是，猴的卵細胞核去核難度非常大。比較小鼠卵母細胞和食蟹猴(獼猴一種)卵母細胞，可以看出，小鼠卵母細胞的細胞核占比非常大，很容易去除；而食蟹猴卵母細胞的細胞核則占比非常小，非常難操作。

二是卵細胞容易提前激活。卵細胞處于休眠狀態，要繼續發育都需要激活，然后才能發育。自然受精的情況下，卵細胞在受精的同時就會被激活。而體細胞克隆，需要外界的刺激才能激活。因此，“喚醒”的時機要求非常精準。但是，使用傳統方式，猴的卵細胞很容易被提前“喚醒”，往往導致克隆“程序”無法正常啟動。

三是體細胞克隆胚胎的發育效率低。孫強給的數據顯示，猴子的囊胚發育率(受精卵發育一段時間才能叫囊胚)遠低牛、老鼠、豬等，優質囊胚率更低。受精卵著床后，很容易早產或流產。2004年，新加坡國立大學做的實驗，7個胚胎，60天內全部流產。

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研究可促老年癡呆癥治療

中科院院士、神經科學研究所所長、腦科學與智能技術卓越創新中心主任蒲慕明說，體細胞克隆猴構建成功的意義首先是證明了獼猴可以用體細胞來克隆。

“獼猴可以成為真正有用的動物模型。體細胞克隆猴的重要性在于能在一年內產生大批遺傳背景相同的模型猴。復雜和精準的基因編輯可以在體外培養的細胞進行，然后用核移植方法產生基因型完全相同的大批胚胎。”蒲慕明說，“用母猴載體懷孕出生一批基因編輯和遺傳背景相同的猴群。這是制作腦科學研究和人類疾病動物模型的關鍵技術。”

此外，他還介紹，克隆猴可以減少個體間差異對實驗的干擾，大大減少實驗動物使用數量。

使用體細胞在體外有效地做基因編輯，準確地篩選基因型相同的體細胞，然后用核移植方法產生基因型完全相同的大批胚胎，

據神經所專家介紹，目前絕大多數腦疾病之所以不能有效治療，主要的原因之一是研發藥物通用的小鼠模型和人類相差甚遠，研發出的藥物在人體檢測時大都無效或有副作用。體細胞克隆猴的成功，將推動我國率先發展出基于非人靈長類疾病動物模型的全新醫藥研發產業鏈，促進針對阿爾茨海默病、自閉癥等腦疾病，以及免疫缺陷、腫瘤、代謝性疾病的新藥研發進程。

- 對話

“研究嚴格遵守實驗動物倫理規章”

昨天，新京報記者專訪了項目負責人、中科院神經所非人靈長類研究平臺主任孫強，了解了這次克隆實驗的一些細節，并探討了動物實驗的倫理問題。

新京報：靈長類動物是人類的近親，但是靈長類動物有很多，為何選擇獼猴做實驗？

孫強：因為獼猴屬的食蟹猴和恒河猴是最常用的非人靈長類實驗動物。

新京報：聽說你們用的并不是成年的猴子，而是胚胎上摘取的組織，胚胎發育幾個月了？

孫強：我們選擇的不是胚胎，而是流產的胎猴組織。這是有區別的。組織來源的流產胎猴約60日齡。

新京報：你們選擇哪里的體細胞？細胞分化是否完全？

孫強：我們選擇的是胎猴的成纖維細胞，是一種分化的體細胞。

新京報：胚胎細胞和體細胞有什么區別，為什么體細胞不能再發育成個體？

孫強：胚胎細胞具有發育的全能性，但是數量有限。體細胞都執行特定功能，就是完全分化了，沒有發育的全能性。再變成全能細胞，需要體外培養增殖。二者的胚胎構建方式不一樣，胚胎細胞是自然受精形成的，體細胞要成為胚胎，就要進行核移植。

新京報：體細胞克隆的一般過程是什么？

孫強：需要把卵母細胞去核，然后將體細胞注入去核卵母細胞中，并融合激活，體外培養成克隆胚胎，然后移植到代孕的受體母猴子宮中，發育完全后，成為克隆后代。

新京報：靈長類克隆有哪些難點？

孫強：我之前也介紹過了，去核難度大，克隆胚胎發育率低等。

新京報：靈長類克隆有何意義？

孫強：簡單來說，就是可為生物和醫學研究及新藥研發提供在進化上與人類更接近的動物模型，且解決了靈長類繁殖周期長和個體差異大的問題。

新京報：克隆靈長類動物，并為人類研究提供，是否存在倫理困境？

孫強：我們嚴格按照實驗動物倫理規章開展相關研究，同時該技術的建立，為將來以猴為主要模型的研究動物數量使用極大減少。

本版采寫/新京報記者 李玉坤 王俊